Kit de anticuerpo de virus de diarrea viral bovina ELISA

Especificación

 

Procedimientos e interpretación de prueba

 

Paso 1 Procedimiento de prueba

1.1 Preparación de la solución de lavado

Working concentración wAshing Liquid:Antes de usar, la solución de lavado debe restaurarse a temperatura ambiente (20-25 grado) y agitarse uniformemente para hacerlo uniforme. Luego, diluya 20 veces la solución de lavado concentrada con agua purificada (por ejemplo, se agrega una solución de lavado concentrada de 5 ml al agua purificada de 95 ml), se mezcla bien y el líquido de lavado diluido se puede almacenar en 2-8 durante 7 días.

1.2 Preparación de la muestra

① Se tomó sangre de animal entera, se centrifugó a 4000 rpm durante 10 minutos y se recogió sobrenadante. El suero también se puede coagular naturalmente sin hemólisis.

② Diluta la muestra de suero 1:50 (agregue 3UL SUPER SUPER AL ALIMENTO DE MUESTRA 147UL) y mezcle bien.

Nota: Los controles negativos y positivos también necesitan diluir.

1.3 Preparación de conjugado enzimático

Diluta el conjugado enzimático 1: 250 (agregue 2ul enzima conjugado (x100) a 498ul de muestra de muestra) y mezcle a fondo.

1.4 Procedimiento de prueba

① Tome la microplaca de la etiqueta de la enzima (según el número de muestras, se puede desmontar y usar varias veces), agregue 100ul del suero diluido al microplato de la etiqueta de la enzima, establezca dos pozos cada uno para muestras negativas y positivas, y agregue 100Ul cada uno para negativo y controles positivos a la reacción bien respectivamente. Agite suavemente la muestra en el pozo, usando la película de la placa de sellado para cubrir la placa y incubar a 37 grados durante 30 minutos.

Informe la película de la placa de sellado, sacude la solución en la placa bien, agregue 300 µl de concentración de trabajo de lavado de líquido a cada pozo y luego deseche el líquido en el pozo. Repita los pasos anteriores 5 veces y finalmente se seca en un papel absorbente limpio.

③Add 100 µl de enzima conjugado a cada pocillo, cubra la placa e incubate a 37 grados durante 45 minutos.

Informe la película de la placa de sellado, sacude la solución en la placa bien, agregue 300 µl de concentración de trabajo de lavado de líquido a cada pozo y luego deseche el líquido en el pozo. Repita los pasos anteriores 5 veces y finalmente se seca en un papel absorbente limpio.

⑤Add de una solución de sustrato de 100 µl a cada pozo, cubra la placa e incube durante 10 minutos a 37 grados de la luz.

⑥Add 50 µl de solución de parada a cada pocillo y determine el resultado en 5 minutos.

 

Paso 2 Interpretación de resultados

 

El valor OD450 de cada pozo se leyó en el lector de microplacas 96-} del pozo.

2.1 Validación

El valor promedio de OD450 nm del control negativo fue<0.1 and the average OD450nm value of positive control /the average OD450nm value of negative control was ≥3, the experimental results were valid. Otherwise, the test should be repeated.

2.2 Método de cálculo

Para cada muestra, calcule el S/P de la siguiente manera utilizando la muestra corregida y los valores de control:

2.3 Interpretación de resultados

Cuando s/p<0.25, it is judged as negative.

Cuando s/p mayor o igual a 0. 35, se juzga como positivo.

Cuando 0. 25 menor o igual a S/P<0.35, it is judged as suspicious, and suggest to repeat sampling and test one week later.

 

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